新红星苹果花蕾蛋白质提取及二维电泳改进方法

摘要：以新红星苹果花蕾为材料，探索适宜的蛋白提取方法和二维电泳条件。苹果蛋白质组二维电泳（2-DE）样品制备方法采用物理化学方法充分裂解植物组织细胞，添加PVP等通过低温操作去除植物体内大量酚类物质，最后离心去除不溶性杂质，第一维为ISODALT等电聚焦，第二维为垂直平板SDS-PAGE。通过样品制备的优化、二维电泳参数的选择以及染色，电泳图谱中可鉴定的蛋白点数量超过519个，蛋白的相对分子质量约为14.0-97.0 ku，主要分布为14.0-67.0 ku；电点约为3.5-9.0，主要分布在4.0-7.0。关键词：苹果；蛋白质；二维电泳技术已成为生命科学研究的热点，同时也为果树花芽分化分子机制的研究带来了新的机遇。二维电泳技术是蛋白质组研究三大关键核心技术之首。基本原理是：第一维是等电聚焦（IEF），根据蛋白质的等电点分离蛋白质；第二个维度是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），它是基于蛋白质亚基分子的。如果质量不同，则在第一维分离的蛋白质进一步分离。蛋白质经过两次电荷和质量分离后，即可得到蛋白质的等电点和分子量信息。 “注：本文涉及的图表、注释、公式等请阅读PDF格式原文”

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